전기영동
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작성일 22-10-16 09:56
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전기영동
전기영동
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전기영동(Electrophoresis)
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전기영동(Electrophoresis)
일반적인 實驗실에서의 전기영동은 DNA나 단백질을 크기에 따라 분획하기 위한 방법 중 하나로써, DNA와 단백질은 전하를 띠고 있기 때문에 전기를 걸어주면 각 분자의 전기적 속성 에 따라 이동하게 된다
전하를 띤 분자화합물에 일정한 전압을 걸어주어 분자량, 전하량등의 물리화학적 성질의 차이에 따라 분리시키는 방법으로, 매질의 종류에 따라 agarose, polyacrylamide, starch gel 전기영동으로 구별
DNA의 경우에는 인산기가 음전하를 띠기 때문에 양극쪽으로 이동을 한다
_SLIDE_3_
DNA 확인방법
형광성 시약인 Ethidium bromide(EtBr)을 처리하게 되면, 이 시약이 젤의 DNA에 끼어들어감으로써, 자외선 하에서 DNA band를 확인할 수 있다
`다양한 range의 DNA marker`
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전기영동(Electrophoresis)
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전기영동(Electrophoresis)
일반적인 實驗실에서의 전기영동은 DNA나 단백질을 크기에 따라 분획하기 위한 방법 중 하나로써, DNA와 단백질은 전하를 띠고 있기 때문에 전기를 걸어주면 각 분자의 전기적 속성 에 따라 이동하게 된다
전하를 띤 분자화합물에 일정한 전압을 걸어주어 분자량, 전하량등의 물리화학적 성질의 차이에 따라 분리시키는 방법으로, 매질의 종류에 따라 agarose, polyacrylamide, starch gel 전기영동으로 구별
DNA의 경우에는 인산기가 음전하를 띠기 때문에 양극쪽으로 이동을 한다
_SLIDE_3_
DNA 확인방법
형광성 시약인 Ethidium bromide(EtBr)을 처리하게 되면, 이 시약이 젤의 DNA에 끼어들어감으로써, 자외선 하에서 DNA band를 확인할 수 있다
`다양한 range의 DNA marker`
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DNA의 이동속도에 influence(영향)을 주는요소들
DNA 분자의 크기
- DNA 분자가 클수록 느리고 이동하고, 작을수록 빨리 이동
전기영동 완충용액의 ingredient과 이온강도
- 이온강도가 낮으면 DNA가 느리게 이동
Agarose 농도
- Agarose 농도가 높을수록 느리게 이동
DNA 형태
- Supercoiled DNA가 가장 빨리, 그 다음 linear DNA, open circular DNA 순으로 이동
전압
- 부하되는 전압이 높을수록 빠르게 이동
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實驗 Method
Sample loading하기
① gel 틀을 1X TAE buffer를 채운 전기영동 장치에 담근다
② comb에 buffer가 차도록 해주며 comb에 가까운 방향이 (-)쪽으로 향하게 한다
③ DNA sample에 dye를 섞어준다
④ 첫 번째 comb에 marker를 loading한다
⑤ 이후로 DNA sample을 …(drop)
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